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超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過(guò)目標(biāo)分子量的一半。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心。如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過(guò)長(zhǎng)時(shí)間或者過(guò)速離心,雖然優(yōu)良品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì),可避免過(guò)度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過(guò)度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。超濾離心管通常由聚碳酸酯等材料制成,可承受高速旋轉(zhuǎn)和高溫高壓。四川再生纖維素離心管供應(yīng)商
超濾是大分子脫鹽、濃縮較方便的方法,重復(fù)性好,得率有保障,已經(jīng)在蛋白、抗體、病毒、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作;在目前大熱的外泌體制備中也已經(jīng)成為主流方法。超濾管采用離心方式快速處理樣品,是很多科研小伙伴們每天要用到的基本裝備。但是,在默克生命科學(xué)團(tuán)隊(duì)推出超濾管中文說(shuō)明書(shū)(AU0.5/4/15)之前,我們發(fā)現(xiàn)近90%的使用者在選擇和使用過(guò)程中因?yàn)槿狈Ρ匾畔⒍鴽](méi)有獲得較佳體驗(yàn),更重要的是,寶貴的樣本會(huì)遭受本可避免的損失!如果目的蛋白是120kDa,請(qǐng)問(wèn)應(yīng)該選擇的超濾管規(guī)格是100k,50k,還是30k甚至10k?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法?這些沒(méi)有統(tǒng)一的說(shuō)法,是因?yàn)椴煌瑥S家的膜的截留分子量的定義不同。四川再生纖維素離心管供應(yīng)商超濾離心管在醫(yī)學(xué)圖像學(xué)中也具有重要意義,如MRI掃描、CT檢查等領(lǐng)域。
超濾離心管使用方法和注意事項(xiàng):1、選擇合適的超濾離心管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾離心管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾離心管。2、新買(mǎi)來(lái)的超濾是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過(guò)膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾離心管需要插在冰上預(yù)冷。3、質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后,有所不同。離心機(jī)的加速度調(diào)至低檔,減小對(duì)膜的壓力。注意,一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開(kāi)離心機(jī),否則離心機(jī)出問(wèn)題時(shí),無(wú)法*時(shí)間處理,后果不可預(yù)測(cè)!
實(shí)驗(yàn)室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,因?yàn)椴AУ碾x心管不能用在高速或者超速離心機(jī)上。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯)、PP(聚丙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對(duì)來(lái)說(shuō)比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀地看到樣品的離心情況,但是比較容易變形,抗有機(jī)溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實(shí)驗(yàn)室一般會(huì)經(jīng)常購(gòu)買(mǎi)離心管。PC (聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬(wàn)轉(zhuǎn)以上的超高速離心。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅、醋酸、鹽酸等不反應(yīng),較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。PP(聚丙烯):半透明,化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會(huì)變脆,所以在離心時(shí)不要在4℃以下。超濾離心管可以有效地去除溶液中的雜質(zhì),使樣品更純凈。
一般來(lái)說(shuō),我們較常用的離心管就是塑料離心管,塑料離心管的優(yōu)缺點(diǎn)也很明顯,優(yōu)點(diǎn)是它的硬度較小,可以利用穿刺法來(lái)得到我們需要的物質(zhì)。但這也正是它的缺點(diǎn),因?yàn)橛捕刃。运哺菀鬃冃危垢g性也差,所以它的壽命是比較短的。塑料離心管的還可以按照材質(zhì)來(lái)選擇,分別有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)這三種材質(zhì)。一般大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室都是將塑料離心管做一次性使用,但一般的實(shí)驗(yàn)室還是會(huì)循環(huán)使用,不推薦循環(huán)使用,因?yàn)檫@樣會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確性,但如果非要做循環(huán)使用的話小編還是建議使用pp材質(zhì)的離心管,然后經(jīng)過(guò)高壓高溫進(jìn)行消毒,pp材質(zhì)是上述三種材質(zhì)中較好的,所以在選擇的時(shí)候我們盡量選擇pp材質(zhì)的離心管。超濾離心管還可以用于提取DNA、RNA等核酸分子,并在基因工程和生物技術(shù)中發(fā)揮重要作用。四川再生纖維素離心管供應(yīng)商
超濾離心管還可用于檢測(cè)空氣樣本中的微粒子、有機(jī)化合物等污染物,并進(jìn)行空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)和控制。四川再生纖維素離心管供應(yīng)商
多肽超濾離心管,垂直設(shè)計(jì)和有效的膜表面積提供了快速的樣品處理,較高的樣品回收率(> 90% 的樣品回收率),以及 80~100 倍濃縮的能力。濃縮物使用吸液器從過(guò)濾裝置中收集,而超濾液則在提供的離心管中收集。超濾離心管是一種可以為蛋白質(zhì)樣本的濃縮和緩沖交換提供可靠準(zhǔn)確結(jié)果的一次性超濾離心式過(guò)濾裝置,與層析、透析等方法相比,超濾對(duì)被處理的分子更加溫和,不需要有機(jī)萃取,不會(huì)導(dǎo)致蛋白變性,且簡(jiǎn)單高效。規(guī)格超濾濃縮器可處理體積4mL 以內(nèi)的樣本,離心管內(nèi)包含一個(gè)內(nèi)置豎直的聚醚砜(PES)膜過(guò)濾裝置,聚醚砜膜具備低蛋白附著、高通量的特點(diǎn),可應(yīng)用在3KD、5KD、10KD、30KD、50KD、100KD 六種不同的截留分子量中。截留分子量標(biāo)識(shí)和體積刻度蝕刻在濃縮器的側(cè)面便于識(shí)別。四川再生纖維素離心管供應(yīng)商