我們通常會(huì)以1/3到1/6甚至更低的區(qū)間來選擇超濾管的孔徑,通常更小的孔徑會(huì)使回收率提高但是超濾的時(shí)間也會(huì)比較長(zhǎng)。一定范圍內(nèi),超濾的回收率和速度是一對(duì)矛盾體,因此可以通過優(yōu)化孔徑的選擇,在回收率可以接受的條件下選擇較大的孔徑,來提高超濾的速度。低溫如< 10 ℃,液體的粘度會(huì)增加,流動(dòng)性會(huì)降低,因此液體的跨膜速率也會(huì)降低。適當(dāng)提高超濾溫度,往往能夠提高超濾的速度。有些客戶需要做幾十ml到幾百ml樣品的濃縮或者緩沖液置換,但是卻使用1支或幾支15ml的超濾管反復(fù)離心來完成操作,這樣必然造成時(shí)間上的浪費(fèi)。怎么辦?一定要挑選適合處理量的產(chǎn)品,減少不必要的反復(fù)離心從而提升超濾的效率。超濾離心管利用超濾膜的過濾作用將目標(biāo)物質(zhì)從混合物中分離出來。金華高離心力離心管價(jià)位
超濾離心管使用的是再生纖維素膜,這種材質(zhì)是蛋白吸附較低的超濾膜。但是對(duì)于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會(huì)增強(qiáng),對(duì)于這種情況,可以嘗試在實(shí)驗(yàn)前對(duì)超濾管進(jìn)行封閉處理,也可以嘗試換成Amicon Ultra0.5或2來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),通過減小膜面積來降低非特異性吸附。超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q水預(yù)清洗。如果干擾仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q水再次清洗后甩干。河南100K超濾離心管選擇超濾離心管通常由聚碳酸酯等材料制成,可承受高速旋轉(zhuǎn)和高溫高壓。
超濾離心管應(yīng)用:除鹽、滲濾或更換緩沖液;濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(單株或雙株 DNA/RNA 樣本)、微生物、洗出液和凈化樣本的生物樣本;凈化組織培養(yǎng)基提取液和細(xì)胞溶解液中的大分子成分,從反應(yīng)混合液中去除引物、連接或分子標(biāo)記,在 HPLC 之前去除蛋白質(zhì)。產(chǎn)品組成:超濾離心管包括一個(gè)蓋子、一個(gè)過濾器和一個(gè)離心管。產(chǎn)品特點(diǎn):較高的樣品回收率 (> 90% 的樣品回收率 );垂直膜的設(shè)計(jì)減少濃縮所用時(shí)間(10-15分鐘);經(jīng)過嚴(yán)格的泄漏測(cè)試;無 DNase、RNase,無熱原、無內(nèi)元素。使用這個(gè)超濾管,廠家強(qiáng)調(diào)一定是一次性的,這個(gè)超濾管必須只能使用一次,不能重復(fù)使用!
選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。超濾離心管在藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究中也具有重要意義,以確定藥物代謝途徑和藥效學(xué)參數(shù)。
回收濃縮液主要有兩種方法:一種是用吸管直接吸取并回收,另外一種是將離心管放入離心機(jī)反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存,因此超濾管常配合離心機(jī)使用。超濾管主要應(yīng)用有以下幾個(gè)方面:1.濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(單株或雙株DNA/RNA樣本)、微生物、洗出液和凈化樣本的生物標(biāo)本。2.凈化組織培養(yǎng)基提取液和細(xì)胞溶解液中的大分子成分,從反應(yīng)混合頁(yè)中去除引物、鏈接或分子標(biāo)記,在HPLC之前去除蛋白質(zhì),3.除鹽、更換緩沖液或滲濾。根據(jù)其材質(zhì)的不同總體可以分為塑料和玻璃的,塑料的離心管用的較多,又可以分為PP、PC、PS等,根據(jù)不同需要,生產(chǎn)廠家會(huì)選擇不同的塑料材料來進(jìn)行制作。超濾離心管還可以用于檢測(cè)樣品中的元素、抗體等生物活性分子。深圳30K超濾離心管生產(chǎn)商
超濾離心管還可用于制備DNA文庫(kù)或RNA文庫(kù),以進(jìn)行基因克隆和功能研究。金華高離心力離心管價(jià)位
注意:超濾離心管中的濾膜一旦潤(rùn)濕 后應(yīng)避免變干。如果在預(yù)清洗后不是立即使用,則讓液體保留在濾膜上,直到使用。6.使用方法:1).將超濾內(nèi)管插入所提供的一個(gè)微量離心管中。2).向超濾管內(nèi)管中加入不超過500 μL的樣本,并蓋上蓋子。3).將蓋好蓋子的超濾管放入離心轉(zhuǎn)子中,讓蓋子的連接帶朝著轉(zhuǎn)子的中間;用一個(gè)類似的超濾管平衡。4).以14,000 x g離心約10-30分鐘,具體時(shí)間取決于所使用超濾管的NMWL。5).離心結(jié)束后將整個(gè)超濾管從離心機(jī)中取出,取出內(nèi)管。6).為了回收濃縮后的溶質(zhì),將內(nèi)管倒過來插在-個(gè)干凈的微量離心管中。放在離心機(jī)中,讓打開的蓋子朝著轉(zhuǎn)子的中間;用一個(gè)類似的超濾管進(jìn)行平衡。以1 ,000 x g離心2分鐘,使?jié)饪s后的樣本從超濾內(nèi)管轉(zhuǎn)移到收集管中。超濾液可以保存在收集管中。金華高離心力離心管價(jià)位