熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會明顯的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅清。血清的保存應(yīng)該注意:熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清。紹興去外泌體胎牛血清哪里有賣
多數(shù)細胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,熱滅活并不會改善細胞的生長,卻降低了支持細胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進的情況下,其促進的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導致的沉淀常常被認為是微生物的污染,從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩。所以胎牛血清不推薦熱滅活。熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗中,通過加熱滅活掉血清中的補體,以避免對免疫試驗的影響。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會真正干預(yù)免疫試驗。故不需滅活。并且,熱滅活反而可能導致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減,進而影響細胞培養(yǎng)效果。臺州優(yōu)等胎牛血清供應(yīng)商胎牛血清提供對維持細胞指數(shù)生長的,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
不同產(chǎn)地的胎牛血清,品質(zhì)也是相差甚遠。值得注意的是,胎牛血清是動物源生物制品,我國對于動物源制品的進口一直有很嚴格的規(guī)定,目前我國批準進口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,合法正規(guī)途徑進口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標注血源地。這意味著,其他血源地的胎牛血清在我國是不允許進口的,在選購進口產(chǎn)品時,要規(guī)避選取來源為禁止輸入國家的相關(guān)產(chǎn)品。合法進口的胎牛血清需符合我國海關(guān)和檢驗檢疫部門的監(jiān)管要求,具備真實完整的進口貨物報關(guān)單和出入境檢驗檢疫入境貨物檢驗檢疫證明。選購胎牛血清時,需要核對廠家是否能提供購買批次的進口報關(guān)單和檢驗檢疫證書,烏拉圭來源的血清還必須具有出口許可證,確保產(chǎn)品來源安全可追溯。
胎牛血清是細胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代,它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細胞的培養(yǎng)。因此,如何在使用過程中保護這些因子的活性,達到較為大的細胞培養(yǎng)效果,就需要正確地使用胎牛血清。正確地使用胎牛血清可分為以下四個方面:正確儲存,避免反復凍融:血清在-20°C凍存。血清避免反復凍融,以免降低因子活性。如一次用不完,應(yīng)進行分裝。血清和培養(yǎng)基應(yīng)盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”,配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免在4°C或更高溫度靜置過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
血清為何要熱滅活,有必要對所有血清都滅活嗎?如何正確的進行滅活?加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,啟動淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學研究中,培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅清。實驗顯示,熱滅清對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,對于非必須的細胞來說血清滅活對于細胞生長只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長速率降低,沉淀物還會明顯增多,不利于細胞觀察。因此,若非必須,不需要對血清進行滅活處理。將需要進行處理的血清置于56℃水浴30min,建議加放空白對照(同體積水)使用溫度計測溫,以測得溫度為56℃時為計時起始點,加熱中可不時輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會明顯增多。莆田無外泌體血清廠家
胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。紹興去外泌體胎牛血清哪里有賣
添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。注意解凍的方法:再高質(zhì)量的胎牛血清也要在使用的時候堅持謹慎的原則,因此在解凍血清的時候,要細心地考慮到其解凍時體積一般會增大的特點,事先為血清預(yù)留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發(fā)生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清。紹興去外泌體胎牛血清哪里有賣