非正規(guī)胎牛血清的產品會存在很多的問題:疫區(qū)來源,無合格質檢使胎牛血清存在生物學污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲等,會直接影響實驗的結果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范,導致采集的原血放置時間過長或操作不當導致溶血,血液中血細胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內產物,里面很多物質都會對細胞有刺激作用,影響實驗的穩(wěn)定性和數據的真實性。血清批次不穩(wěn)定,添加來補?很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進行加工生產,為了保障血清的培養(yǎng)效果會對血清進行處理,較為常見的是添加、轉鐵蛋白、BSA、生長因子等,還有的會和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類操作對所有生物學實驗都有巨大的影響。血清的主要作用是提供促接觸和生長因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。武漢優(yōu)等血清多少錢
如何避免血清中產生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產生:解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。武漢優(yōu)等血清多少錢血清的主要作用:提供基本營養(yǎng)物質:氨基酸、維生素、無機物、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質。
血清的保存應該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。
較為低血清試驗的要求。內有毒的檢測:內有毒的,又叫脂多糖(LPS)或脂寡糖(LOS),存在于革蘭氏陰性菌的細胞外膜。臨床上,內有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示,如腦膜炎球菌。動物體內,內有毒的能夠導致發(fā)熱或者誘導炎癥反應;細胞培養(yǎng)中,內有毒的能夠誘導細胞反應異常。通常,采用鱟阿米巴樣細胞裂解實驗(LAL檢測)檢測內有毒的水平。LAL是從美洲鱟的血液中制備的,對內有毒的非常靈敏,在微量內有毒的存在情況下就凝結。阿米巴樣細胞相當于哺乳動物的白細胞。特異性血清及其加工方式,熱鈍化:胎牛血清的常規(guī)處理方式是熱鈍化,即放在56°水浴30分鐘;其目的是使血清中的補體成分及一些未知的細胞生長抑制分子失活。與胎牛血清的其它加工方式一樣,熱鈍化處理過程必須小心謹慎,因為血清中的生長因子容易在較高溫度或者較長時間加熱條件下失活,甚至產生沉淀。每100ml人血清含有蛋白質6-8g,其中主要是白蛋白和球蛋白。
血清的常見問題:保存方法,血清應保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。解凍方法:將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。避免產生沉淀物:解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。血清提供和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質、類固醇(雌二醇、睪酮、孕酮)等。廈門標準血清哪家好
胎牛血清提供對維持細胞指數生長的,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。武漢優(yōu)等血清多少錢
添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細胞產生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質,總之出現這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。注意解凍的方法:再高質量的胎牛血清也要在使用的時候堅持謹慎的原則,因此在解凍血清的時候,要細心地考慮到其解凍時體積一般會增大的特點,事先為血清預留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發(fā)生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清。武漢優(yōu)等血清多少錢