細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘??；血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長；配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn)；培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。胎牛血清起酸堿度緩沖液作用?；窗矡o外泌體血清

非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會(huì)存在很多的問題：疫區(qū)來源，無合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學(xué)污染：支原體、噬菌體、病毒、原蟲等，會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范，導(dǎo)致采集的原血放置時(shí)間過長或操作不當(dāng)導(dǎo)致溶血，血液中血細(xì)胞裂解，血清顏色呈紅色或暗紅色，這樣的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物，里面很多物質(zhì)都會(huì)對(duì)細(xì)胞有刺激作用，影響實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實(shí)性。血清批次不穩(wěn)定，添加來補(bǔ)？很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進(jìn)行加工生產(chǎn)，為了保障血清的培養(yǎng)效果會(huì)對(duì)血清進(jìn)行處理，較為常見的是添加、轉(zhuǎn)鐵蛋白、BSA、生長因子等，還有的會(huì)和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌，更有甚者用的根本就不是牛血清，此類操作對(duì)所有生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都有巨大的影響。金華無外泌體血清多少錢胎牛血清的其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚。

國際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性，不會(huì)產(chǎn)生沉淀，同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間。關(guān)于胎牛血清的滅活：真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ]有形成有效補(bǔ)體，如果針對(duì)補(bǔ)體滅活的話，就不需要。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來決定。胎牛血清的濃度：胎牛血清通常是以2%～20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合后配成完全培養(yǎng)基。曾有文獻(xiàn)報(bào)道，不同胎牛血清濃度對(duì)細(xì)胞存在一定的影響，尤其是干細(xì)胞和原代細(xì)胞。具體很好濃度需要用戶根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來確定，以既保證培養(yǎng)的效果，又避免血清的浪費(fèi)。

血清的安全風(fēng)險(xiǎn)因素主要有以下方面：地理因素，地理因素包括血清產(chǎn)地的流行病學(xué)趨勢、基礎(chǔ)設(shè)施情況以及血源供應(yīng)量。措施得當(dāng)可以預(yù)防能避免的動(dòng)物疾病，同時(shí)產(chǎn)地國穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)設(shè)施，對(duì)保證供應(yīng)鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續(xù)供應(yīng)。生產(chǎn)，生產(chǎn)遵循cGMP指南，則可保證血清質(zhì)量，降低有關(guān)無菌過濾、摻加和標(biāo)簽錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。cGMP為現(xiàn)場審核的開展提供了框架。生產(chǎn)過程中對(duì)血清進(jìn)行有效的無菌過濾也是十分重要的。產(chǎn)品質(zhì)控，有效的無菌過濾使得細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn)很低。對(duì)于支原體和病毒篩查，一些相關(guān)規(guī)范內(nèi)部存在一定的方法靈活性，這使得采取不同方法進(jìn)行支原體和病毒篩查成為可能，并且有時(shí)使得要篩查的病毒種類無需太多。有效輻照，要進(jìn)一步降低外源因子風(fēng)險(xiǎn)，可對(duì)血清進(jìn)行輻照(25–40 kGy)。但輻照并不能保證病毒污染的完全去除。輻照過量會(huì)導(dǎo)致FBS效能下降。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。

血清的保存應(yīng)該注意：需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月，由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。血清提供和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)、類固醇（雌二醇、睪酮、孕酮）等。莆田賽業(yè)血清哪里有賣

胎牛血清的蛋白質(zhì)含量：3.5%～5.0%（ w/v）；血紅蛋白含量 ≤ 0.02%（ w/v）?；窗矡o外泌體血清

添加胎牛血清的時(shí)候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液，因?yàn)槿绻囵B(yǎng)液有沉淀的存在，會(huì)使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點(diǎn)，除此之外，細(xì)胞的表面還很可能會(huì)覆蓋一層油狀物質(zhì)，總之出現(xiàn)這樣的情況會(huì)極其不利于細(xì)胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失，可以把所有有沉淀的血清進(jìn)行收集并做離心處理，之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。注意解凍的方法：再高質(zhì)量的胎牛血清也要在使用的時(shí)候堅(jiān)持謹(jǐn)慎的原則，因此在解凍血清的時(shí)候，要細(xì)心地考慮到其解凍時(shí)體積一般會(huì)增大的特點(diǎn)，事先為血清預(yù)留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來，便不會(huì)發(fā)生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清?；窗矡o外泌體血清