細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:細胞生長過老,破碎的細胞殘??;血清質(zhì)量不好,反復凍融的結(jié)果;配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細胞生長;配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等。鹽城優(yōu)級胎牛血清多少錢
國際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,不會產(chǎn)生沉淀,同時能縮短血清融化時間。關于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體,如果針對補體滅活的話,就不需要。其他情況根據(jù)實驗設計來決定。胎牛血清的濃度:胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養(yǎng)基中,混合后配成完全培養(yǎng)基。曾有文獻報道,不同胎牛血清濃度對細胞存在一定的影響,尤其是干細胞和原代細胞。具體很好濃度需要用戶根據(jù)自己的實驗來確定,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費。舟山去外泌體血清哪里有賣大量未參加凝血反應的物質(zhì)則與血漿基本相同。
血清的保存應該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
胎牛血清作為動物細胞培養(yǎng)基中的關鍵組分之一,在動物細胞培養(yǎng)中占據(jù)重要地位。胎牛血清是在封閉的屠宰機構對未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血而獲取的牛血清制品,牛血清制品隨著取血對象的年齡變化可分為胎牛血清,新生牛血清以及(成年)牛血清,血清的成分及含量會隨年齡變化。而胎牛血清由于血清采集時間早,其胎球蛋白較多,并富含多種生長因子。同時,由于未接觸外界環(huán)境,胎牛血清所含的內(nèi)有毒的、補體等細胞有害成分和抗體水平均是較低的。因此,胎牛血清從細胞培養(yǎng)的效果來看是較為很好的牛血清制品,在細胞培養(yǎng)的應用較為較廣。血清可提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)。
細胞培養(yǎng)是很多下游實驗的基礎,細胞培養(yǎng)的好壞會直接影響后續(xù)實驗的成功和穩(wěn)定,而胎牛血清作為細胞培養(yǎng)的主要試劑對實驗的重要性不言而喻!胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,因為胎牛未進食過母乳,所以IgG含量低,且含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,故目前多數(shù)實驗人員選擇的都是胎牛血清進行動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。提供對維持細胞指數(shù)生長的,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到醫(yī)治作用。是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。起酸堿度緩沖液作用。提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化。湖州特級血清報價
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物。鹽城優(yōu)級胎牛血清多少錢
多數(shù)細胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,熱滅活并不會改善細胞的生長,卻降低了支持細胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進的情況下,其促進的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導致的沉淀常常被認為是微生物的污染,從而給用戶和供應商都帶來不必要的麻煩。所以胎牛血清不推薦熱滅活。熱滅活一般是指在做免疫相關的試驗中,通過加熱滅活掉血清中的補體,以避免對免疫試驗的影響。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會真正干預免疫試驗。故不需滅活。并且,熱滅活反而可能導致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減,進而影響細胞培養(yǎng)效果。鹽城優(yōu)級胎牛血清多少錢
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