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廣州全自動離子通道應(yīng)用

來源: 發(fā)布時間:2023-02-17

在進(jìn)行細(xì)胞吸附式膜片鉗記錄時,一般來說,我們通過電壓鉗(voltageclamp,VC)模式將細(xì)胞膜電位維持在-60mV(大多數(shù)脊椎動物神經(jīng)元的靜息膜電位),從而保證通過電極尖銳端的電流即為跨膜離子流。一般來說,細(xì)胞吸附式膜片鉗可以作為對照來驗(yàn)證其他單通道記錄構(gòu)型下通道活動的改變情況,也可以用來檢測化學(xué)物質(zhì)引起的通道的和活動/對通道活動的影響是否經(jīng)過胞內(nèi)信使的介導(dǎo)。這里有一點(diǎn)需要注意,每個待研究細(xì)胞的Em都會有輕微的差異,因此我們在分析cell-attached的數(shù)據(jù)的時候,需要拿出事先記錄好的Em,一般有三種方法:用胞內(nèi)記錄或全細(xì)胞記錄的方法,獲得一個平均Em;在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時,patch破裂,在電流為0的情況下記錄到的電勢就為Em;結(jié)合離子通道的其他數(shù)據(jù)來反向推算Em。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。廣州全自動離子通道應(yīng)用

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膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細(xì)胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點(diǎn),同時通過細(xì)胞內(nèi)微電極引導(dǎo)記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術(shù)的優(yōu)勢是可利用負(fù)反饋電子線路,將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。湖州全自動膜片鉗哪家好膜片鉗使用操作注意:拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時關(guān)閉。

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膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的優(yōu)點(diǎn):與傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄相比,全細(xì)胞記錄也有很多好處,比如電極尖銳端開口較大,電阻只2~20MΩ,易于進(jìn)行電壓/電流鉗制,噪聲很大程度下降,電極電壓降也變得很小,補(bǔ)償非常容易。與單通道記錄相比,單通道記錄無法獲得整個細(xì)胞的功能變化信息,而全細(xì)胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細(xì)胞功能(甚至細(xì)胞之間信息傳遞)的改變,加之易于更換細(xì)胞外液,所以,全細(xì)胞記錄更適用于對離子通道的藥理學(xué)研究,即加各種通道blocker啦,激動劑啦之類的。

膜片鉗只適用于藥物的初篩和二次篩選,且對樣本有很高的選擇性,而傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)可適用于各種樣本,應(yīng)用范圍廣,能夠分析檢測所有的離子通道類型,同時能夠分析離子通道的動力學(xué)特征。因此目前,傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)仍然是不可替代的。在進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)時,玻璃電極給負(fù)壓并吸住細(xì)胞,形成高阻封接,破膜,給藥,記錄數(shù)據(jù)的過程,都需要細(xì)胞保持比較好的活性狀態(tài),才能更加高效的獲得有效數(shù)據(jù)。因此細(xì)胞的穩(wěn)定性就成了評估樣品好壞的關(guān)鍵。膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動的技術(shù)。膜片鉗使用操作注意:不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤。

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膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細(xì)胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點(diǎn),同時通過細(xì)胞內(nèi)微電極引導(dǎo)記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來。膜片鉗的應(yīng)用:對藥物作用機(jī)制的研究。廈門藥理學(xué)離子通道網(wǎng)站

全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):實(shí)驗(yàn)迅速,通量高。一般每天可達(dá)到50個實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)左右。廣州全自動離子通道應(yīng)用

膜片鉗實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞膜型:一個完整的細(xì)胞膜電學(xué)模型包含幾個基本組分:膜電容,膜電阻和膜電勢。這三個電學(xué)組分形成的原因各不相同:1、膜電容(membranecapacitance,Cm)的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層,對離子和其他水溶性物質(zhì)均不通透,遂使細(xì)胞膜成為了電的不良導(dǎo)體,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞外液-磷脂雙分子層-細(xì)胞內(nèi)液構(gòu)成了細(xì)胞膜電容。Cm的大小與細(xì)胞膜表面積成正比,與磷脂雙分層的厚度成反比。膜電容在這里的作用,主要為完成細(xì)胞的充放電過程。2、膜電阻(membraneresistance,Rm)的形成是由于細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)通道,也就是離子通道的存在。離子和小的極性分子只有通過通道才能進(jìn)出細(xì)胞膜,因此膜電阻在這里的作用,主要就是控制離子的進(jìn)出。3、膜電勢(membranepotential,Vm)又稱膜電位,源自膜內(nèi)外離子濃度的差異,離子濃度的差異又源于細(xì)胞膜對離子的選擇透過性。膜電位一般可分為靜息電位、動作電位和等級電位(不懂的自己去查,此處不贅述)。膜電位的作用主要是維持神經(jīng)元的興奮性,并改變離子通道的狀態(tài)。廣州全自動離子通道應(yīng)用

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