胎牛血清制備:離心,將準備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機抽氣口上。打開壓縮機,用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶內(nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。胎牛血清是通過母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血。常州進口血清哪里有賣
胎牛血清-血清的主要成分:血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。胎牛血清在存儲的時候要在零下濕度的溫度下進行保存,并且需要避免陽光的照射,需要用恒溫冰箱來進行保存。連云港標準級胎牛血清品牌血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等。
胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實驗證明,經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清,對于大多數(shù)的細胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至可能因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,從而造成細胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會明顯的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此類沉淀物增加得更多,這常常會使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議客戶,若非必須,可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省客戶寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量。
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化學小分子、核苷酸、某些鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細胞因子、葡萄糖、殘留Antibiotic和其他外源分子。那么透析的效果如何?以及透析到何時呢?由于不可能監(jiān)測全部小分子,因此常選用葡萄糖為體現(xiàn)。血清中葡萄糖<5mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監(jiān)測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細監(jiān)測pH值和滲透壓。熱滅活反而影響胎牛血清中的活性成分。
用于體外細胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:包括以下步驟:采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿,具體步驟如下:采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質(zhì)量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進行混合,將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內(nèi)充分滋潤容器內(nèi)壁;將胎牛血液置入上述滋潤過的取血容器內(nèi),搖動使其與胎牛血液均勻混合;將混合均勻的含有胎牛血液的混合液B置入采的血試管,保持血液在40℃以下恒溫狀態(tài),然后將采的血試管在離心機中以3000-14000r/min轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5-30分鐘,分離出血漿、血小板、血球,將所得血漿、血小板、血球分別采用采的血試管分離存放;胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基。南通賽業(yè)血清供應商
胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。常州進口血清哪里有賣
胎牛血清FBS的處理方法?胎牛血清FBS一般需要冷凍保存,在-5到-20°C之間,并且可以在2到8°C的溫度下解凍。將血清等分并冷凍在較小的部分(通常為50ml試管)中通常很有用,以避免多次冷凍和解凍循環(huán)。有時,一些FBS等分試樣在冷凍溫度下仍保留在液體中。這是由于缺乏用于開始結(jié)晶(冷凍)的成核中心(顆粒物質(zhì))。如果您只是用手指輕彈管子,它們通常幾乎會立即凝固。解凍后有一些沉淀是很常見的。沉淀物,可能是由于某些血清蛋白的變性,可以通過短暫的離心來清理,這通常不會影響血清的質(zhì)量。常州進口血清哪里有賣
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