膜片鉗技術操作方法：開始封接:調低微操步進速度，使電極尖銳端慢慢向細胞靠近，如發(fā)現基線方波突然變小，封接電阻上升時，即停止電極下降，通過注射器給電極負壓，封接成功的可見方波很快變小，電阻升至G歐。此時，調節(jié)快電容補償按鈕，將快電容電流補償掉，如封接穩(wěn)定后，準備破膜。破膜:在鉗制電位水平-60mV時，漏電流<20pA，給予比較大的負壓(也可根據情況使用ZAP電破方式破膜)，將要破時可見基線上下浮動，破后，可見基線前后有兩個較大的慢電容電流。全自動膜片鉗系統技術指標：操作簡單，全過程可自動化。紹興神經生物學腦片膜片鉗

膜片鉗電生理技術服務的數據如何處理：1.內面向外式膜片細胞內外和電極內的溶液均可調控,既能較容易地改變細胞內的離子或物質濃度,又能把酶等直接加于膜的內側面,適宜研究胞內物質對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側物質,且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細胞內和第二信使與通道的調節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側,可以任意改變膜外物質的濃度,有利于研究離子、遞質對膜外表面的作用,多用于研究細胞膜外側受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經過第二信使系統。因細胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內成分,而且電極管內必須充以低鈣液。膜片鉗的數據如何處理：細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。金華細胞生物學膜片鉗實驗方案全自動膜片鉗系統技術指標：藥液交換非常迅速，作用時間快。

膜片鉗技術基本原理與特點：又由于玻璃微電極管徑很小，其下膜面積光約1μm2，在這么小的面積上離子通道數量很少，一般只有一個或幾個通道，經這一個或幾個通道流出的離子數量相對于整個細胞來講很少，可以忽略，也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略，那么，只要保持電極內電位不變，則電極下的一小片細胞膜兩側的電位差就不變，從而實現電位固定另外，高阻封接技術還很大降低了電流記錄的背景噪聲，從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率，如時間分辨率可達10μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12A。記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數和開放概率。

在進行細胞吸附式膜片鉗記錄時，一般來說，我們通過電壓鉗（voltageclamp,VC）模式將細胞膜電位維持在-60mV（大多數脊椎動物神經元的靜息膜電位），從而保證通過電極尖銳端的電流即為跨膜離子流。一般來說，細胞吸附式膜片鉗可以作為對照來驗證其他單通道記錄構型下通道活動的改變情況，也可以用來檢測化學物質引起的通道的和活動/對通道活動的影響是否經過胞內信使的介導。這里有一點需要注意，每個待研究細胞的Em都會有輕微的差異，因此我們在分析cell-attached的數據的時候，需要拿出事先記錄好的Em，一般有三種方法:用胞內記錄或全細胞記錄的方法，獲得一個平均Em；在實驗結束時，patch破裂，在電流為0的情況下記錄到的電勢就為Em;結合離子通道的其他數據來反向推算Em。膜片鉗技術的應用范圍：對單細胞形態(tài)與功能關系的研究。

膜片鉗技術之全細胞記錄的優(yōu)點：與傳統的細胞內記錄相比，全細胞記錄也有很多好處，比如電極尖銳端開口較大，電阻只2~20MΩ，易于進行電壓/電流鉗制，噪聲很大程度下降，電極電壓降也變得很小，補償非常容易。與單通道記錄相比，單通道記錄無法獲得整個細胞的功能變化信息，而全細胞記錄（尤其是腦片或在體記錄）所獲信息則能反映細胞功能（甚至細胞之間信息傳遞）的改變，加之易于更換細胞外液，所以，全細胞記錄更適用于對離子通道的藥理學研究，即加各種通道blocker啦，激動劑啦之類的。膜片鉗使用操作注意：電腦里面的軟件不得隨意刪改。杭州醫(yī)學實用膜片鉗原理

膜片鉗的數據如何處理：通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡。紹興神經生物學腦片膜片鉗

膜片鉗技術基本原理與特點：膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術不能替代的作用。膜片鉗技術是在電壓鉗技術發(fā)展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值。紹興神經生物學腦片膜片鉗

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