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莆田透射電鏡技術應用

來源: 發(fā)布時間:2023-05-05

冷凍電鏡技術是什么呢?冷凍電鏡用于生物樣品三維結構解析,包含單顆粒分析、微晶電子衍射和冷凍電子斷層掃描3種技術。冷凍電鏡單顆粒分析技術(cryo-EMSPA)是一種以單顆粒形式分析生物分子組裝的新方法,通過將負染電鏡篩選獲得的合適濃度的生物分子樣品快速冷凍,使生物大分子以近天然狀態(tài)存在于無定形冰中,然后進行冷凍樣品的篩選、數(shù)據(jù)收集和三維結構解析,從而獲得高分辨率的生物分子結構。冷凍電鏡單顆粒分析技術能夠從分子層面進行詳細的研究,解析基于結構的藥物研發(fā)的分子基礎,而冷凍電子斷層掃描能夠從亞細胞水平觀察目標分子在原位細胞環(huán)境中的作用位點和作用機制,相信在不久的將來能夠用于進一步確認基于結構的藥物研究的可靠性。微晶電子衍射不只能夠進行小分子微晶結構解析,也可與現(xiàn)有技術互補,進行生物大分子及其復合物的微晶結構解析。冷凍電鏡技術也正在成為助力醫(yī)藥研發(fā)的有力手段。莆田透射電鏡技術應用

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冷凍電鏡技術的原理:透射電鏡成像過程中,電子束穿透樣品,將樣品的三維電勢密度分布函數(shù)沿著電子束的傳播方向投影至與傳播方向垂直的二維平面上。1968年,AronKlug發(fā)現(xiàn)ZX截面定理,提出可以通過三維物體不同角度的二維投影在計算機內進行三維重構來解析獲得物體的三維結構。根據(jù)這一原理,利用透射電鏡獲得生物樣品多個角度的放大電子顯微圖像,即有可能在計算機里重構出它的三維空間結構。在冷凍電子顯微學結構解析的具體實踐中,依據(jù)不同生物樣品的性質及特點,可以采取不同的顯微鏡成像及三維重構方法。目前主要使用的幾種冷凍電子顯微學結構解析方法包括:電子晶體學、單顆粒重構技術、電子斷層掃描重構技術等,它們分別針對不同的生物大分子復合體及亞細胞結構進行解析。莆田透射電鏡技術應用冷凍電鏡技術采用的快速冷凍技術關鍵在于“快速”。

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冷凍電鏡技術是在20世紀70年代提出的,早在20世紀70年代科學家們就利用冷凍電鏡研究病毒分子的結構,頭次提出了冷凍電鏡技術的原理、方法以及流程的概念。冷凍電鏡的發(fā)展:冷凍電鏡到底是什么?從上世紀70年代興起至今,冷凍電子顯微技術(cryo-EM)已經跨越了40多年的發(fā)展歷史,經歷了冷凍制樣、單顆粒圖像分析和三維重構算法等關鍵性技術的突破。通俗而言,冷凍電鏡就是在傳統(tǒng)透射電子顯微鏡之上,加上了低溫傳輸系統(tǒng)和冷凍防污染系統(tǒng)。

冷凍電鏡技術近年來獲得了迅猛的發(fā)展,取得了許多具有重大意義的成果。冷凍電鏡將生物分子進行冷凍便可進行高分辨率成像,還具有分辨率高、更接近天然狀態(tài)、適用研究對象普遍等優(yōu)勢。同時,系統(tǒng)地綜述了冷凍電鏡技術在科學研究中的應用,并展望冷凍電鏡技術未來的發(fā)展。冷凍電鏡(cryo-electronmicroscopy,cryo-EM)技術,是在低溫下使用透射電子顯微鏡觀察樣品的顯微技術,即把樣品冷凍并保持低溫放進顯微鏡里面,用高度相干的電子作為光源從上面照射,透過樣品和附近的冰層,受到散射,再利用探測器和透鏡系統(tǒng)把散射信號成像記錄下來,較后進行信號處理,得到樣品的結構。冷凍電子顯微鏡技術還將普遍應用于細胞組織的超微結構解析,對解開生命活動的規(guī)律和機制等產生更大影響。

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單顆粒冷凍電鏡技術樣品的篩選和數(shù)據(jù)采集:在開始高分辨數(shù)據(jù)采集前,可以利用冷凍電鏡先對樣品質量進行評估,包括但不限于蛋白濃度、穩(wěn)定性和分布,冰層厚度、質量和載網(wǎng)各處的均一性等的檢查。用戶可以在120kV電鏡或200kV電鏡上進行此篩樣過程。待到樣品通過篩選,用戶可以利用300kV或200kV電鏡采集更大的數(shù)據(jù)量來幫助開展2D和3D分析。200kV-TalosArctica透射電鏡配備了直接電子探測相機FalconIII,在樣品質量較高時,較高可以獲得<3?的數(shù)據(jù)。目前的300kV-TitianKrios透射電鏡有兩套,其中一臺配備了目前行業(yè)前列的K3直接電子探測相機,另一臺配備有K2相機和能量過濾器,兩套電鏡均能夠進行全自動、長時間無人照看的數(shù)據(jù)收集操作,可實現(xiàn)樣品的大規(guī)模數(shù)據(jù)采集,并獲得極高分辨率的結構信息。收集得到數(shù)以萬計的單顆粒物照片后,用戶可以使用平臺集群已安裝的常用三維重構計算軟件以及相關生物軟件對數(shù)據(jù)集進行計算處理。冷凍電鏡技術能夠揭示生物分子細節(jié)。東莞低溫冷凍透射電子顯微鏡技術哪家好

冷凍電鏡技術之冷凍透射電鏡優(yōu)點:加速電壓高,電子能穿透厚樣品。莆田透射電鏡技術應用

冷凍電子顯微技術學解析生物大分子及細胞結構的中心是透射電子顯微鏡成像,包括樣品制備、圖像采集、圖像處理及三維重構等幾個基本步驟。三維重構:數(shù)據(jù)處理的較終目的是為了獲得生物樣品的三維質量密度圖,由二維圖像推知三維結構的方法即三維重構。其理論原理是在1968年由DeRosier和Klug提出的中心截面定理:一個函數(shù)沿某方向投影函數(shù)的傅里葉變換等于此函數(shù)的傅里葉變換通過原點且垂直于此投影方向的截面函數(shù)。由于樣品性質的不同,圖像分析的方法也有差異。莆田透射電鏡技術應用

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