冷凍電鏡技術(shù)的原理:冷凍電子顯微學(xué)解析生物大分子及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的中心是透射電鏡成像,其基本過程包括樣品制備、透射電鏡成像、圖像處理及結(jié)構(gòu)解析等幾個基本步驟。在透射電鏡成像中,電子槍產(chǎn)生的電子在高壓電場中被加速至亞光速并在高真空的顯微鏡內(nèi)部運動,根據(jù)高速運動的電子在磁場中發(fā)生偏轉(zhuǎn)的原理,透射電鏡中的一系列電磁透鏡對電子進(jìn)行匯聚,并對穿透樣品過程中與樣品發(fā)生相互作用的電子進(jìn)行聚焦成像以及放大,Z后在記錄介質(zhì)上形成樣品放大幾千倍至幾十萬倍的圖像,利用計算機(jī)對這些放大的圖像進(jìn)行處理分析即可獲得樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)。冷凍電鏡技術(shù)的獨特優(yōu)勢:冷凍電鏡單粒子法既可以對具有對稱結(jié)構(gòu)的大分子進(jìn)行研究。福州低溫冷凍透射電子顯微鏡技術(shù)哪里有
冷凍電鏡技術(shù),是用于掃描電鏡的很低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)(Cryo-SEM),可實現(xiàn)直接觀察液體、半液體及對電子束敏感的樣品,如生物、高分子材料等。電鏡觀察:樣品經(jīng)過很低溫冷凍、斷裂、鍍膜制樣(噴金/噴碳)等處理后,通過冷凍傳輸系統(tǒng)放入電鏡內(nèi)的冷臺(溫度可至-185℃)即可進(jìn)行觀察。其中,快速冷凍技術(shù)可使水在低溫狀態(tài)下呈玻璃態(tài),減少冰晶的產(chǎn)生,從而不影響樣品本身結(jié)構(gòu),冷凍傳輸系統(tǒng)保證在低溫狀態(tài)下對樣品進(jìn)行電鏡觀察。南京冷凍電子顯微鏡技術(shù)服務(wù)公司冷凍電鏡技術(shù)中單顆粒分析法優(yōu)點:解析生物大分子的理論分辨率可達(dá)原子級。
冷凍電鏡技術(shù)中的電子斷層掃描技術(shù)與單顆粒分析法的比較:單顆粒分析法:它的優(yōu)點:解析生物大分子的理論分辨率可達(dá)原子級;樣品受總輻射值小;對稱顆粒的解析分辨率更高;分子量越大,結(jié)果越好;電子斷層掃描技術(shù):優(yōu)點:簡單直接;對樣品的要求較低;常用于對細(xì)胞或者生物組織結(jié)構(gòu)的三維重構(gòu);但是,對同一樣品位置多次拍照時,電子束對樣品的輻照損傷就會成為了比較嚴(yán)重的問題;當(dāng)樣品旋轉(zhuǎn)角度受到電子束透過樣品厚度能力的限制。
冷凍電鏡技術(shù)具有分辨率高、更接近天然狀態(tài)、適用研究對象普遍等特點,越來越多的科學(xué)家開始把冷凍電鏡技術(shù)作為研究的一個新方向。冷凍電鏡技術(shù)與X射線技術(shù)和核磁共振技術(shù)互相補(bǔ)充,讓絕大多數(shù)的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)都可以被解析。眾多領(lǐng)域的研究者們將在未來冷凍電鏡新的技術(shù)方法的開發(fā)中發(fā)揮重要的作用,成為該技術(shù)的進(jìn)一步完善與成熟的重要力量。冷凍電鏡領(lǐng)域研究者們則需要以主動開放的態(tài)度吸引其他領(lǐng)域研究者的合作,并積極迎接來自更多領(lǐng)域研究者的挑戰(zhàn),保持并發(fā)展自己的技術(shù)特長,站在技術(shù)發(fā)展的制高點上選準(zhǔn)研究方向,始終在冷凍電鏡的技術(shù)前沿上開疆拓土。冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡通過對樣品的冷凍,降低電子束對樣品的損傷,從而得到更加真實的樣品形貌。
什么是冷凍電鏡技術(shù)?冷凍電鏡技術(shù),全稱是冷凍電子顯微鏡技術(shù),是在低溫下使用透射電子顯微鏡觀察樣品的顯微技術(shù)。冷凍電鏡技術(shù),是一種重要的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究方法,它與X射線晶體學(xué)、核磁共振一起構(gòu)成了高分辨率結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。冷凍電鏡技術(shù)的研究,主要是冷凍成像和蛋白快速冷凍技術(shù)。根據(jù)諾貝爾獎評委會的說法,冷凍電鏡技術(shù)使生物分子成像,變得更加簡單,把生物化學(xué)帶入了一個新紀(jì)元。這項技術(shù)可以用來確定,溶液中生物分子的高清晰度結(jié)構(gòu)。冷凍電鏡技術(shù)其實比較抽象,一直以來它主要的問題是其圖像噪音極高、信號極低,研究的目標(biāo)是從中提取近原子分辨率的結(jié)構(gòu)信息。可以形象的比喻為在一個機(jī)器轟鳴的工廠,監(jiān)測一只螞蟻爬行的聲音。冷凍電鏡的目標(biāo),就是要完成這項艱巨的任務(wù)。因此,可見這項技術(shù)成果的科學(xué)價值。冷凍電鏡技術(shù)之冷凍蝕刻電子顯微鏡優(yōu)點:樣品通過冷凍,可使其微細(xì)結(jié)構(gòu)接近于活的狀態(tài)。蕪湖單顆粒冷凍電鏡技術(shù)哪家好
冷凍電鏡技術(shù)中的單顆粒分析法的研究對象可以是具有某種對稱性的顆粒,也可不具有任何對稱性的蛋白分子。福州低溫冷凍透射電子顯微鏡技術(shù)哪里有
冷凍電鏡技術(shù)之冷凍透射電鏡:冷凍透射電鏡(Cryo-TEM)通常是在普通透射電鏡上加裝樣品冷凍設(shè)備,將樣品冷卻到液氮溫度(77K),用于觀測蛋白、生物切片等對溫度敏感的樣品。通過對樣品的冷凍,可以降低電子束對樣品的損傷,減小樣品的形變,從而得到更加真實的樣品形貌。它的優(yōu)點主要體現(xiàn)在以下幾個方面:首先是加速電壓高,電子能穿透厚樣品;第二是透鏡多,光學(xué)性能好;第三是樣品臺穩(wěn)定;第四是全自動,自動換液氮,自動換樣品,自動維持清潔。福州低溫冷凍透射電子顯微鏡技術(shù)哪里有
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