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常州全自動膜片鉗全細(xì)胞記錄設(shè)計公司

來源: 發(fā)布時間:2023-06-01

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點:又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個或幾個通道,經(jīng)這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細(xì)胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內(nèi)電位不變,則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變,從而實現(xiàn)電位固定另外,高阻封接技術(shù)還很大降低了電流記錄的背景噪聲,從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率,如時間分辨率可達10μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12A。記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進一步計算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率。膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作。常州全自動膜片鉗全細(xì)胞記錄設(shè)計公司

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膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化,因而,膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外,還特需防震工作臺、屏蔽罩、膜片鉗放大器、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡、數(shù)據(jù)采集卡、數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)等。廈門細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗應(yīng)用膜片鉗使用的注意事項:干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。

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膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)記錄的幾種形式:全細(xì)胞記錄構(gòu)型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續(xù)以負(fù)壓抽吸使電極管內(nèi)細(xì)胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細(xì)胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或?qū)⒉9苓B到標(biāo)準(zhǔn)高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細(xì)胞全細(xì)胞電流可達nA級,全細(xì)胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細(xì)胞內(nèi)部之間的電阻)應(yīng)當(dāng)補償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細(xì)胞內(nèi)的真正電位。電流愈大,愈需對串聯(lián)電阻進行補償。

膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動的技術(shù)。是用來研究單個離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實驗技術(shù)。這項技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要的作用,也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)對實驗人員的技術(shù)要求非常高,一般地,實驗人員需要經(jīng)過嚴(yán)格的長期的訓(xùn)練,才能準(zhǔn)確且快速的操作。膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對離子通道生理與病理作用機制的研究。

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膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細(xì)胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實現(xiàn)。電極管內(nèi)與細(xì)胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細(xì)胞內(nèi)液的成分。細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。如果有目的地將膜電位鉗制在某一程度,可做到選擇性抑制某些通道的活性而只記錄某種通道電流的總和,并可在同一細(xì)胞上觀察幾種不同通道的情況。通過改變內(nèi)部介質(zhì),如改變電極液成分,或在電極液中加入所需藥物,通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,該手段在全細(xì)胞記錄中廣泛應(yīng)用。膜片鉗使用的注意事項:浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。廈門細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗應(yīng)用

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:在神經(jīng)科學(xué)中的研究。常州全自動膜片鉗全細(xì)胞記錄設(shè)計公司

膜片鉗法的各種模式:細(xì)胞吸附模式:將膜片微電極吸附在細(xì)胞膜上對但離子通道電流進行記錄的模式。其優(yōu)點是在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境保持正常的條件下可以對離子通道活動進行觀察記錄。但是由于不能認(rèn)為直接地控制細(xì)胞內(nèi)環(huán)境條件也不能確切的潘明細(xì)胞內(nèi)點位,所以其缺點是不清楚膜片上的實效點位。膜內(nèi)面向外模式:從細(xì)胞吸附模式將已形成巨阻抗封接的膜片微電極向上提起時,則膜片即從細(xì)胞體上被切割分隔下來,形成膜內(nèi)面向外的模式。常規(guī)全細(xì)胞模式:在細(xì)胞吸附模式上將膜打穿成孔,記錄膜片以外部位的全細(xì)胞膜的離子電流,這時全細(xì)胞模式。常州全自動膜片鉗全細(xì)胞記錄設(shè)計公司

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