膜片鉗電生理技術(shù)的樣本種類:從較早的肌細胞、神經(jīng)元和內(nèi)分泌細胞發(fā)展到血細胞、肝細胞、耳蝸毛細胞、胃壁細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、免疫細胞、精母細胞等多種細胞;從急性分散細胞和培養(yǎng)細胞發(fā)展到組織片乃至整體動物;從蝸牛、青蛙、蠑螈、爪蟾母細胞發(fā)展到雞細胞、大鼠細胞、人細胞等;從動物細胞發(fā)展到細菌及植物細胞。此外,膜片鉗技術(shù)還普遍地應(yīng)用到平面雙分子層(planarbilayer)、脂質(zhì)體(liposome)等人工標本上。研究對象:從對離子通道(配體門控性離子通道、電壓門控性離子通道、第二信使介導的離子通道、機械敏感性離子通道及縫隙連接通道等)的研究發(fā)展到對離子泵、交換體及可興奮細胞的胞吞、胞吐機制的研究等。膜片鉗電極已不單單是傳統(tǒng)意義上的電信號記錄電極,它還可作為其他研究方法的工具使用,如用于進行單細胞PCR技術(shù)時的細胞內(nèi)容物抽吸。膜片鉗使用的注意事項:浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。細胞生物學離子通道服務(wù)
膜片鉗技術(shù)基本原理與特點:又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1 μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個或幾個通道,經(jīng)這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內(nèi)電位不變,則電極下的一小片細胞膜兩側(cè)的電位差就不變,從而實現(xiàn)電位固定另外,高阻封接技術(shù)還很大降低了電流記錄的背景噪聲,從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率,如時間分辨率可達10 μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12 A。合肥全自動離子通道方案膜片鉗使用的注意事項:向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多,以防液體進入銀絲底部增加噪聲。
膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的實驗流程:(1)破膜:加大微電極內(nèi)的負壓將細胞膜吸破,此時可見時間常數(shù)較大的全細胞膜電容電流的出現(xiàn),以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸;②也可用注射器施加負壓;③還可以在施加負壓的基礎(chǔ)上進行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜,形成的入口電阻Ra較大。(2)細胞破膜后,若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高,則應(yīng)該將所施加的負壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉;反之,適當保留一點負壓對破膜狀態(tài)及細胞的穩(wěn)定更有利。(3)全細胞膜電容補償:調(diào)節(jié)全細胞膜電容補償板塊中的Cm和Rs進行膜電容電流補償,使輸出電流信號中細胞膜電容電流成分消失或變至較小。(4)串聯(lián)電阻補償:打開串聯(lián)電阻補償鍵,調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補償至不產(chǎn)生震蕩為度。(5)漏減調(diào)節(jié)。(6)正式進入標本細胞的檢測。
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:1)操作簡單,全過程可自動化。2)實驗迅速,通量高。一般每天可達到50個實驗數(shù)據(jù)左右。3)藥液交換迅速。細胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進行,所以藥液交換非常迅速,作用時間快,外灌流時間常數(shù):~200ms內(nèi)灌流時間常數(shù):~2s。4)藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5)信號準確,噪聲少。使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”,極大的減少了噪聲源,記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6)擴展功能多。配套擴展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等等。7)軟件強大。軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實驗,進行細胞吸附、封接和維持全細胞記錄模式;并兼容常規(guī)膜片鉗放大。膜片鉗的應(yīng)用:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位施加各種濃度的藥物來研究。
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點,同時通過細胞內(nèi)微電極引導記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術(shù)的優(yōu)勢是可利用負反饋電子線路,將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設(shè)備均具有良好的機械穩(wěn)定性。合肥藥理學膜片鉗電生理技術(shù)設(shè)計公司
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。細胞生物學離子通道服務(wù)
膜片鉗技術(shù)之全細胞式與細胞吸附式的區(qū)別:全細胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細胞吸附式?jīng)]啥兩樣,無非就是把電極戳在細胞上然后記錄它的電活動。但事實是,這兩者存在天壤之別。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上:在cell-attached的記錄中,我們不需要用電極戳破細胞膜,只需將其懟在細胞膜上即可;但在whole-cell的記錄中,我們不只要將電極懟進細胞膜內(nèi),而且還不能懟得過深或過淺,否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是,要形成全細胞記錄必須打破細胞膜,但由于這個操作比較厲害,所以要破膜時請相信玄學。其次,第二大區(qū)別在電阻補償上:在cell-attached的記錄中,由于我們無需打通細胞內(nèi)外膜,因此細胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當中,但是在whole-cell中,串聯(lián)電阻(Rs)就存在了,因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細胞的跨膜電位,故我們需要對其進行補償。這些注意事項包括:電極電容及細胞膜電容補償問題,漏電流問題,液接電位的校正問題,空間鉗位問題,細胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題,電極內(nèi)液的成分問題等。細胞生物學離子通道服務(wù)
上海司鼎生物科技有限公司是國內(nèi)一家多年來專注從事免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)的老牌企業(yè)。公司位于放鶴路1088號,成立于2016-06-07。公司的產(chǎn)品營銷網(wǎng)絡(luò)遍布國內(nèi)各大市場。公司現(xiàn)在主要提供免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)等業(yè)務(wù),從業(yè)人員均有免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)行內(nèi)多年經(jīng)驗。公司員工技術(shù)嫻熟、責任心強。公司秉承客戶是上帝的原則,急客戶所急,想客戶所想,熱情服務(wù)。公司與行業(yè)上下游之間建立了長久親密的合作關(guān)系,確保免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)在技術(shù)上與行業(yè)內(nèi)保持同步。產(chǎn)品質(zhì)量按照行業(yè)標準進行研發(fā)生產(chǎn),絕不因價格而放棄質(zhì)量和聲譽。在市場競爭日趨激烈的現(xiàn)在,我們承諾保證免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)質(zhì)量和服務(wù),再創(chuàng)佳績是我們一直的追求,我們真誠的為客戶提供真誠的服務(wù),歡迎各位新老客戶來我公司參觀指導。