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如何挑選好的胎牛血清:好的胎牛血清是實驗的成功的前提是所有實驗人做細(xì)胞培養(yǎng)的共識,如何挑選好的胎牛血清,可以從以下幾個方面著手。1.外觀,好的血清應(yīng)是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若棕紅色,說明,血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象。2、總蛋白含量,胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。3、血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于,20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。4、pH國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān)。胎牛血清加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。南京去外泌體胎牛血清供應(yīng)商
選購胎牛血清:為了保證胎牛血清產(chǎn)品的均一性和穩(wěn)定性,胎牛血清生產(chǎn)需遵循相關(guān)規(guī)定進(jìn)行操作。一般來說,胎牛血清制備需經(jīng)過以下幾個步驟:采集,離心,分離,無菌過濾,用來制作血清的牛血,是通過采集多頭牛的血液混合而成的,因此,想要在同一批次得到大批量品質(zhì)穩(wěn)定的血清,獲得大量健康、符合當(dāng)?shù)胤煞ㄒ?guī)的供體動物,是先決條件。采集(5-8月齡牛胚胎)、離心以及粗血清分離的過程,不能保證完全的無菌,因此,整個過程中,無菌過濾就成為重中之重。嚴(yán)格的無菌過濾,能夠盡可能祛除細(xì)菌、支原體等微生物的污染,保證胎牛血清品質(zhì)。徐州去外泌體胎牛血清哪里有我們常會看到胎牛血清的標(biāo)注上有對產(chǎn)品滅活也有沒有滅活的。
胎牛血清制備:離心,將準(zhǔn)備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對稱放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開壓縮機(jī),用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶內(nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。
胎牛血清:胎牛血清(FBS),胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量3.5%~5.0%(w/v)。3、血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)。4、無菌檢驗陰性。5、支原體檢驗陰性。6、細(xì)菌內(nèi)的毒性≤5(EU/ml)。7、牛腹瀉病毒陰性。8、大腸桿菌噬菌體陰性。9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長曲線(接種濃度)較大增殖濃度≥2.5×106個/ml,細(xì)胞倍增時間≤15h克隆率≥85%。胎牛血清提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone。
用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:包括以下步驟:采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿,具體步驟如下:采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質(zhì)量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進(jìn)行混合,將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內(nèi)充分滋潤容器內(nèi)壁;將胎牛血液置入上述滋潤過的取血容器內(nèi),搖動使其與胎牛血液均勻混合;將混合均勻的含有胎牛血液的混合液B置入采的血試管,保持血液在40℃以下恒溫狀態(tài),然后將采的血試管在離心機(jī)中以3000-14000r/min轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5-30分鐘,分離出血漿、血小板、血球,將所得血漿、血小板、血球分別采用采的血試管分離存放;胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清。上海標(biāo)準(zhǔn)血清哪里有
胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。南京去外泌體胎牛血清供應(yīng)商
如何區(qū)別真假胎牛血清:主要技術(shù)指標(biāo),1、內(nèi)的毒性,標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)的毒性是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)的毒性含量的高低可表現(xiàn)出采的血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。目前,國產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求,很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)的毒性含量反而更高,只要求不高于50EU/ml,高出我國標(biāo)準(zhǔn)10倍??梢?,內(nèi)的毒性含量偏高不影響質(zhì)量,除非含量極高,預(yù)示著已經(jīng)污染。2、總蛋白含量,胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。南京去外泌體胎牛血清供應(yīng)商
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