膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值。嘉興細(xì)胞生物學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站
膜片鉗電生理記錄技術(shù):膜片鉗技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機(jī)過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。將該部分細(xì)胞采用負(fù)壓吸破,可以形成比較常見的全細(xì)胞記錄模式,可以研究整個細(xì)胞的生理功能和離子通道電生理功能。廣州醫(yī)學(xué)膜片鉗實驗服務(wù)膜片鉗使用操作流程及注意事項:在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細(xì)胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點(diǎn),同時通過細(xì)胞內(nèi)微電極引導(dǎo)記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術(shù)的優(yōu)勢是可利用負(fù)反饋電子線路,將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。
膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗使用操作流程及注意事項:電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計算機(jī)進(jìn)行分析處理。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄 儀器 反映這些變化。膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”。莆田醫(yī)學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站
在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設(shè)備均具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性。嘉興細(xì)胞生物學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站
膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用:應(yīng)用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細(xì)胞信號的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。嘉興細(xì)胞生物學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站