多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟油等。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份;石蠟油 5 份;混合,高壓滅菌后保存。用時(shí)加熱融化,冷卻至 50℃左右,加抗原進(jìn)行乳化處理。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA);弗氏不完全佐劑 10ml;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理。初次免疫時(shí),建議用弗氏完全佐劑,以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。再次免疫時(shí),一般不用完全佐劑,而采用弗氏不完全佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí),一般不用弗氏完全佐劑,以免卡介苗的干擾??贵w調(diào)理在自身免疫性疾病等領(lǐng)域顯示出了巨大的潛力。北京專業(yè)抗體哪家好
1975年,Kohler和Milstein建立了單克隆抗體(monoclonai antibody,mAb)技術(shù),使規(guī)?;苽涓咛禺愋?、均質(zhì)性抗體成為可能。然而,鼠源性mAb在人體反復(fù)免疫后出現(xiàn)的人抗鼠抗體(human anti-mouseantibody,HAMA)很大程度上限制了mAb的臨床應(yīng)用。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人們已經(jīng)可以通過(guò)抗體工程技術(shù)制備人一鼠嵌合抗體、人源化抗體或人源抗體。天然的抗原分子中常含有多種不同的抗原表位,以該抗原刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)可同時(shí)啟動(dòng)多種B細(xì)胞克隆,產(chǎn)生的抗體中會(huì)含有多種針對(duì)不同抗原表位的抗體,因此稱之為多克隆抗體。湖北Prestige抗體補(bǔ)給公司抗體的結(jié)構(gòu)多樣性使得它們能夠識(shí)別和結(jié)合各種形狀和性質(zhì)的分子。
抗體特性和功能:IgA分為兩型:血清型為單體,主要存在于血清中,只占血清Ig總量的10%~15%;分泌型IgA(secretory IgA,SIgA)為二聚體,由J鏈連接,含內(nèi)皮細(xì)胞合成的分泌片,經(jīng)分泌性上皮細(xì)胞分泌至外分泌液中。SIgA合成和分泌的部位在腸道、呼吸道、乳腺、唾液腺和淚腺,因此主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液。SIgA是外分泌液中主要的抗體類別,參與黏膜局部免疫,通過(guò)與相應(yīng)病原微生物結(jié)合,阻止病原體黏附到細(xì)胞表面,在局部抗傳染中發(fā)揮重要作用。SIgA在黏膜表面也有中和有害素的作用。新生兒易患呼吸道、胃腸道傳染可能與IgA合成不足有關(guān)。嬰兒可從母親初乳中獲得SIgA,這是一種重要的自然被動(dòng)免疫過(guò)程。
抗體鉸鏈區(qū):鉸鏈區(qū)(hinge region)位于CH1與CH2之間,富含脯氨酸,易伸展彎曲,從而改變抗原結(jié)合部位之間的距離,有利于抗體結(jié)合位于不同位置的抗原表位。鉸鏈區(qū)易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解,產(chǎn)生不同的水解片段。不同類Ig的鉸鏈區(qū)不盡相同,例如人IgGl、IgG2、IgG4和IgA的鉸鏈區(qū)較短,IgG3和IgD的鉸鏈區(qū)較長(zhǎng),而IgM和IgE無(wú)鉸鏈區(qū)。J鏈和分泌片:Ig輕鏈和重鏈除上述基本結(jié)構(gòu)外,某些類別的Ig還含有其他輔助成分,如J鏈和分泌片 ??贵w還可以通過(guò)啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng)引發(fā)炎癥反應(yīng),吸引其他免疫細(xì)胞前來(lái)去除病原體。
多克隆抗體免疫動(dòng)物:免疫用的動(dòng)物建議選擇適齡的健康雄性動(dòng)物,雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對(duì)免疫應(yīng)答的個(gè)別差異,免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬(wàn)別。就其化學(xué)成分而言,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原。為了獲得較好的抗血清,建議是選用蛋白質(zhì)抗原,如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的 cDNA 文庫(kù)或免疫印跡的抗血清,建議選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原,其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同,這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。抗體可以通過(guò)中和病原體、啟動(dòng)免疫細(xì)胞和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等方式發(fā)揮作用。成都Prestige抗體生產(chǎn)廠家
抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性可以直接殺傷傳染的細(xì)胞,起到去除病原體的作用。北京專業(yè)抗體哪家好
抗體特性和功能:IgM占血清Ig總量的5%~10%,血清濃度約為1mg/ml。單體IgM以膜結(jié)合型表達(dá)于B細(xì)胞表面,構(gòu)成B細(xì)胞抗原受體,只表達(dá)mlgM是未成熟B細(xì)胞的標(biāo)志。分泌型IgM為五聚體,是分子量很大的Ig,沉降系數(shù)為19S,稱為巨球蛋白(macroglobulin),一般不能通過(guò)血管壁,主要存在于血液中。五聚體IgM含有10個(gè)Fab段,具有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力;含有5個(gè)Fc段,比IgG更易啟動(dòng)補(bǔ)體。天然血型抗體為IgM,血型不匹配的輸血,可導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血反應(yīng)。IgM是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中很早合成和分泌的抗體,在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產(chǎn)生IgM,故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內(nèi)傳染(如風(fēng)疹病毒或巨細(xì)胞病毒等傳染)。IgM也是初次體液免疫應(yīng)答中很早出現(xiàn)的抗體,是機(jī)體抗傳染免疫的“先頭”;血清中IgM升高,提示新近發(fā)生傳染,可用于傳染的早期診斷。北京專業(yè)抗體哪家好