外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體：300μg樣品（相當(dāng)于300μg總蛋白）用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋，與protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯(lián)在磁珠上（以避免抗體洗脫下來(lái)對(duì)外泌體的干擾），請(qǐng)參考默克磁珠操作說(shuō)明書。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推薦使用試劑目錄號(hào)信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經(jīng)建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備操作標(biāo)準(zhǔn)，相較于需要昂貴的設(shè)備及繁瑣操作的超速密度梯度離心，用實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的工具解決外泌體制備的高大上問(wèn)題，真是惠而不費(fèi)，不亦樂(lè)乎？超濾濃縮管服務(wù)電話是多少呢。楊浦區(qū)默克2ml超濾濃縮管聯(lián)系電話

將裝有樣品的Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管接在Amicon?Pro上樣池的下端。 3. Amicon?Pro上樣池內(nèi)加入預(yù)先準(zhǔn)備好的1.5 mL含有染料的反應(yīng)混合液。 4. 4,000×g離心15 min。 5. 優(yōu)化選做：將樣品在室溫下多孵育30 min。 6. 上樣池中加入1.5 mL PBS± NaN3。 7. 4,000×g離心15 min換液同時(shí)濃縮。 8. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管1,000×g離心回收標(biāo)記好的抗體。 特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)： 特別的反轉(zhuǎn)離心回收設(shè)計(jì)，滯留體積很小，樣品損失少， 樣品回收率通常>90% 濃縮倍數(shù)達(dá)到50-200倍 Ultracel?再生纖維素膜和聚丙烯外殼將吸附降至比較低 特別設(shè)計(jì)的死體積防止離干，保證樣品回收率和活性 松江區(qū)濃縮管超濾濃縮管的系列有很多。

首先，Amicon? Ultra超濾管的蛋白比較低起始濃度為25ug/ml。請(qǐng)確保樣本的起始濃度大于這個(gè)濃度。其次，如果問(wèn)題仍然出現(xiàn)，請(qǐng)不要丟棄樣本濾過(guò)液以便用于分析可能的原因： 1）如果目的樣本在濾過(guò)液中，那么請(qǐng)排查： a）是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？ b）使用的離心力是否是在限定范圍內(nèi)？如果使用的是rpm，請(qǐng)換算成相應(yīng)的g離心力，具體換算方法請(qǐng)垂詢。 c）離心機(jī)**近是否有校準(zhǔn)過(guò)？ d）是否***嘗試這個(gè)蛋白？

蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的**終濃度不超過(guò) 20mg/ml。對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進(jìn)方法是： 1）離心力降為推薦離心力的30%-50% 2）改用截留分子量更大的超濾管（如原本選用10k，此時(shí)可以選擇30k） 3）在濃縮過(guò)程中取出超濾管，用***頭反復(fù)吹吸幾次后再繼續(xù)濃縮 Amicon? Ultra超濾膜中含有微量甘油。如果出現(xiàn)這種情況，請(qǐng)先用0.1 N NaOH清洗再離心。***用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用，如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤(rùn)濕狀態(tài)，避免重新干燥。上海超濾濃縮管批發(fā)商。

默克密理博 Amicon? Ultra 離心式超濾管因其完美的設(shè)計(jì) 一經(jīng)推出即成為生物樣品操作的行業(yè)頭牌產(chǎn)品。不論是蛋白、 核酸、***或顆粒物，抑或低濃度樣品或?qū)氋F的活性樣品， Amicon? Ultra 都能兼顧高回收率和操作的方便性及標(biāo)準(zhǔn) 化，并滿足下游各種應(yīng)用的要求，使研究者處理樣品時(shí)倍感輕 松。 Amicon? Ultra 超濾管的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)： 有效濃縮同時(shí)保證比較高的蛋白回收率 合理的死體積設(shè)計(jì) ?避免樣品離干而降低回收率 ?便于估計(jì)和控制樣品濃縮倍數(shù) ?重復(fù)性好，便于樣品數(shù)據(jù)相互比較對(duì)于不同的需求我們選擇不同的超濾濃縮管系列。青浦區(qū)默克0.5ml超濾濃縮管規(guī)格

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